?。ㄒ唬┐姿崂w維素薄膜電泳醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯。電泳廠家又名—— 電著（著），泳漆，電沉積。創(chuàng)始于二十世紀(jì)六十年代，由福特汽車公司較先應(yīng)用于汽車底漆。陰極電泳它是將具有導(dǎo)電性的被涂物浸漬在裝滿水稀釋的、濃度比較低的電泳涂料槽中作為陽(yáng)極（或陰極）、在槽中另設(shè)置與其相對(duì)應(yīng)的陰極（或陽(yáng)極），在兩極間通直流電，在被涂物上析出均一、水不溶的涂膜的一種涂裝方法。由該物質(zhì)制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。這種薄膜對(duì)蛋白質(zhì)樣品吸附性小，幾乎能完全消除紙電泳現(xiàn)的 ;拖尾 ;現(xiàn)象，又因?yàn)槟さ挠H水性比較小，它所容納的緩沖液也少，電泳時(shí)電流(Electron flow)的大部分由樣品傳導(dǎo)，所以分離速度快，電泳時(shí)間短，樣品用量少，5μg的蛋白質(zhì)可得到滿意的分離效果。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。醋酸纖維素膜經(jīng)過(guò)冰醋酸乙醇（酒精)溶液或其它透明液處理后可使膜透明化有利于對(duì)電泳圖譜的光吸收掃描測(cè)定和膜的長(zhǎng)期保存。⒈材料與試劑 醋酸纖維素膜一般使用市售商品，常用的電泳緩沖液為pH8.6的巴比妥緩沖液，濃度在0.05-0.09mol/L。⒉操作控制突出點(diǎn)⑴膜的預(yù)處理：必須于電泳前將膜片浸泡于緩沖液，浸透后，取出膜片并用濾紙吸去多余的緩沖液，不可吸得過(guò)干。⑵加樣：樣品用量依樣品濃度、本身性質(zhì)、染色方法及檢測(cè)方法等因素決定。對(duì)血清蛋白質(zhì)的常規(guī)電泳分析，每cm加樣線不超過(guò)μl，相當(dāng)于60-80μg的蛋白質(zhì)。⑶電泳：可在室溫下進(jìn)行。電壓為25V/cm，電流為0.4-0.6mA/cm寬。⑷染色：一般蛋白質(zhì)染色常使用氨基黑和麗春紅，糖蛋白用甲基苯(methylbenzene)胺藍(lán)或過(guò)碘酸-Schiff試劑，脂蛋白則用蘇丹黑或品紅亞硫（化學(xué)符號(hào)：S）酸染色。⑸脫色與透明：對(duì)水溶性染料較普遍應(yīng)用的脫色劑是5％醋酸水溶液。為了長(zhǎng)期保存或進(jìn)行光吸收掃描測(cè)定，可浸入冰醋酸：無(wú)水乙醇＝30:70（V/V）的透明液中。（二）凝膠電泳以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質(zhì)的區(qū)帶電泳法稱為凝膠電泳。其中聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用于分離蛋白質(zhì)及較小分子的核酸。瓊脂糖凝膠孔徑較大，對(duì)一般蛋白質(zhì)不起分子篩作用，但適用于分離同工酶及其亞型，大分子核酸等應(yīng)用較廣，介紹如下：⒈瓊脂糖凝膠電泳的原理概述 瓊脂糖是由瓊脂分離制備的鏈狀多糖。其結(jié)構(gòu)單元是D-半乳糖和3.6-脫水-L-半乳糖。許多瓊脂糖鏈依氫(Hydrogen)鍵及其它力的作用使其互相盤(pán)繞形成繩狀瓊脂糖束，構(gòu)成大網(wǎng)孔型凝膠。因此該凝膠適合于免疫復(fù)合物、核酸與核蛋白的分離、鑒定及純化。在臨床生化檢驗(yàn)中常用于LD
　　H、CK等同工酶的檢測(cè)。陰極電泳根據(jù)被涂物的極性和電泳涂料的種類，電泳涂裝法可分為兩種,陰極電泳涂裝法被涂物為陰極，所采用的電泳涂料是陽(yáng)離子型（帶正電荷)。⒉瓊脂糖凝膠電泳分離核酸的基本技術(shù) 在一定濃度的瓊脂糖凝膠介質(zhì)中，DNA分子的電泳遷移率與其分子量的常用對(duì)數(shù)成反比；分子構(gòu)型也對(duì)遷移率有影響，如共價(jià)閉環(huán)DNA＞直線DNA＞開(kāi)環(huán)雙鏈DNA。當(dāng)凝膠濃度太高時(shí)，凝膠孔徑變小，環(huán)狀DNA（球形）不能進(jìn)入膠中，相對(duì)遷移率為0，而同等大小的直線DNA（剛性棒狀）可以按長(zhǎng)軸方向前移，相對(duì)遷移率大于0。⑴設(shè)備與試劑：瓊脂糖凝膠電泳分為垂直及水平型兩種。其中水平型可制備低濃度瓊脂糖凝膠，而且制膠與加樣都比較方便，故應(yīng)用比較廣泛(extensive)。核酸分離一般用連續(xù)緩沖體系，常用的有TBE（0.08mol/L Tris·HCl，pH8.5，0.08mol/L硼酸（Boricacidhighpurity），0.0024mol/L EDTA）和THE（0.04mol/L Tris·HCl。pH7.8，0.2mol/L醋酸鈉，0.008mol/L EDTA）。⑵凝膠制備：用上述緩沖液配制0.5％-0.8％瓊脂糖凝膠溶液，沸水浴或微波爐加熱使之融化，冷至55℃時(shí)加入溴化乙錠（EB）至終濃度為0.5μg/ml，然后將其注入玻璃板或有機(jī)玻璃 (是一種通俗的名稱，縮寫(xiě)為PMMA)板組合安裝好的模子中，厚度依樣品濃度而定。注膠時(shí)，梳齒下端距玻璃板0.5-.0mm，待脫凝固后，取出梳子，加入適量電極（electrode）緩沖液使板膠浸沒(méi)在緩沖液下mm處。⑶樣品制備與加樣：溶解于TBE或THE內(nèi)的樣品應(yīng)含指示染料（0.025％溴酚藍(lán)或桔黃橙）、蔗糖（0％-5％）或甘油（5％-0％），也可使用2.5％Fico Ⅱ增加比重，使樣品集中，每齒孔可加樣5-0μg。⑷電泳：一般電壓為5-5V/cm。對(duì)大分子的分離可用電壓5V/cm。電泳過(guò)程(guò chéng)較好在低溫條件下進(jìn)行。⑸樣品回收：電泳結(jié)束后在紫外燈下觀察樣品的分離情況(Condition)，對(duì)需要的DNA分子或特殊片段可從電泳后的凝膠中以不同的方法進(jìn)行回收，如電泳洗脫法：在紫外燈下切取含核酸區(qū)帶的凝膠，將其裝入透析袋（內(nèi)含適量新鮮電泳緩沖液），扎緊透析袋后，平放在水平型電泳槽兩電極之間的淺層緩沖液中，00V電泳2-3小時(shí)，然后正負(fù)電極交換，反向電泳2分鐘，使透析袋上的DNA釋放(release)出來(lái)。吸出含DNA的溶液，進(jìn)行酚抽提、乙醇（chún）（酒精)沉淀等步驟（procedure)即可完成樣品的回收。其它還有低融點(diǎn)瓊脂糖法、醋酸銨溶液浸出法、冷凍擠壓法等，但各種方法都僅僅有利于小分子量DNA片段（＜kb）的回收，隨著DNA分子量的增大，回收量顯著（striking）下降(descend)。
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　

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